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【PPT】金黃色葡萄球菌檢驗【23頁(yè)PPT課件】 - 醫學(xué)資源下載
資源作者：沙漠雪狼
資源分類(lèi)：藥物 - 臨床藥學(xué)
資源屬性：PPT
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上傳日期：2012-12-27 09:22:44

【ppt】金黃色葡萄球菌檢驗【23頁(yè)PPT課件】金黃色葡萄球菌檢驗 概況 葡萄球菌屬微球菌科，本菌有19個(gè)菌種，從人體上可檢出12個(gè)種。 葡萄球菌屬主要與皮膚腺體和溫血動(dòng)物的粘膜相關(guān)系，有些種是人及動(dòng)物的條件致病菌?！緋pt】金黃色葡萄球菌檢驗【23頁(yè)PPT課件】 金黃色葡萄球菌對人類(lèi)有致病性，通常被稱(chēng)為病原性球菌。金黃色葡萄球菌可引起化膿性炎癥，又稱(chēng)為化膿性球菌。 金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性 形態(tài)與染色： 金黃色葡萄球菌的典型形態(tài)呈球形，直徑0.4～1.2?m，大小不一，平均直徑約為0.8?m。 革蘭氏染色陽(yáng)性，呈葡萄串狀排列。無(wú)鞭毛、無(wú)芽胞。在陳舊培養物中，衰老的菌體常轉為革蘭氏陰性。 【ppt】金黃色葡萄球菌檢驗【23頁(yè)PPT課件】 培養特性： 易培養，對營(yíng)養要求不高，在普通培養基中生長(cháng)良好。 需氧或兼性厭氧。 最適生長(cháng)溫度37℃，最適生長(cháng)pH 7.4。耐鹽性強，在含10～15%的氯化鈉培養基中仍能生長(cháng)，可用于篩選菌種。 在普通營(yíng)養瓊脂平板上培養18～24ｈ，可形成圓形、表面光滑、不透明的菌落?？僧a(chǎn)生金黃色色素，色素為脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落內，不滲至培養中。 在血平板上可形成明顯透明的溶血環(huán)。為β型溶血。 可產(chǎn)生卵磷脂，在卵黃高鹽培養基上形成周?chē)邪咨恋憝h(huán)的菌落。 大多數菌株分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅試驗、 VP試驗多為陽(yáng)性，不產(chǎn)生靛基質(zhì)。觸酶陽(yáng)性。 金黃色葡萄球菌的酶 金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生血漿凝固酶和耐熱DNA酶。這兩種酶均與金黃色葡萄球菌的致病性有關(guān)。 血漿凝固酶：與金黃色葡萄球菌的致病力密切相關(guān)。一般認為，血漿凝固陽(yáng)性的金黃色葡萄球菌菌株有致病力。否則為無(wú)力的菌株。血漿凝固酶對熱穩定，能抵抗60℃30min甚至100℃30min后，仍能保存大部分活性。 耐熱DNA酶作為除血漿凝固酶外鑒定金黃色葡萄球菌致病力的指標之一。該酶的最適pH為9.0?！緋pt】金黃色葡萄球菌檢驗【23頁(yè)PPT課件】 金黃色葡萄球菌腸毒素：是金黃色葡萄球菌一種重要的致病物質(zhì)。本菌引起的食物中毒是因為食品污染了金黃葡萄球菌后，由細菌產(chǎn)生大量腸毒素而導致的。 近年報導表明，50%以上的金黃色葡萄球菌菌株在實(shí)驗室條件下可產(chǎn)生腸毒素，并且1個(gè)菌株能產(chǎn)生兩種或兩種以上的腸毒素。 腸毒素是一種可溶性蛋白質(zhì)，由單個(gè)無(wú)分支的肽鏈組成。分子量約為3000左右。易溶于水，難溶于有機溶劑。 耐熱，經(jīng)100℃煮沸30min不被破壞，也不受胰蛋白酶的影響。食物中的腸毒素耐熱性更強，一般烹調溫度不能將其破壞。218~248 ℃的油中需30min才能被破壞?？梢鸺毙晕改c炎。 根據腸毒素的血清型，可分A、B、C（C1、C2）、D、E 5 個(gè)型。A型腸毒素引起的食物中毒較多，約占50%左右。其他依次為D、C、B和E型。也有A＋D、A＋B、A＋C、B＋C等。 A型腸毒素毒力較強，攝入1μg即可引起中毒；B型毒力較弱攝入25μg，才引起中毒。一般認為引起人中毒的最小劑量是1.0~7.2μg/kg。 金黃色葡萄球菌的檢測程序 增菌培養基【ppt】金黃色葡萄球菌檢驗【23頁(yè)PPT課件】 7.5%氯化鈉肉湯：為葡萄球菌選擇性增菌培養基，因金黃色葡萄球有耐受高鹽的特性，因而能在此增菌液中生長(cháng)，除某些嗜高鹽的海洋菌外，大多數細菌都被增菌液中的高鹽所抑制。 胰酪胨大豆肉湯：含氯化鈉達10%，以胰酪胨替代牛肉浸粉，并加入少量磷酸氫二鉀和葡萄糖促進(jìn)葡萄球菌的生長(cháng)。 樣品的稀釋 固體和半固體樣品：稱(chēng)取25g樣品至盛有225 mL磷酸鹽緩沖稀釋液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內，8000r/min～10000 r/min均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225 mL稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min，制成1:10的樣品勻液。 液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取25mL樣品至盛有225mL磷酸鹽緩沖稀釋液或生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶(瓶?jì)阮A置適當數量的無(wú)菌玻璃珠)中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。 增菌與分離培養 增菌培養：吸取5mL上述樣品勻液，接種于50mL 7.5%氯化鈉肉湯或10%胰酪胨大豆肉湯培養基內，36℃±1℃培養18h～24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長(cháng)，污染嚴重時(shí)在10%胰酪胨大豆肉湯內呈混濁生長(cháng)。 將上述培養物，分別劃線(xiàn)接種到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培養18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培養18h～24h或45h～48h。 分離培養基 Baird-Parker瓊脂：培養基中含有卵黃亞碲酸鉀，能抑制大多數細菌的繁殖，并能促進(jìn)金黃色葡萄球菌的生長(cháng)使其產(chǎn)生黑色和暈圈。培養基中的丙酮酸鈉和甘氨酸也能促進(jìn)金黃色葡萄球菌的生長(cháng)?！緋pt】金黃色葡萄球菌檢驗【23頁(yè)PPT課件】 金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)：圓形、光滑凸起、濕潤，直徑約2~3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周?chē)鸀橐换鞚釒?，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹(shù)膠的硬度，偶爾可見(jiàn)無(wú)混濁帶和透明圈的非典型菌落。 長(cháng)期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些，外觀(guān)可能粗糙并干燥。 分離培養基 血瓊脂：是一種基礎培養基，含有5%的脫纖維血(羊血或兔血)。用于觀(guān)察金黃色葡萄球菌的溶血現象。金黃色葡萄球菌在血瓊脂平板上呈β溶血。 金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)：呈金黃色，有時(shí)也呈白色，大而突起，圓形、不透明、表面光滑，周?chē)型该鞯摩氯苎h(huán)。 革蘭氏染色 血漿凝固酶試驗 試驗原理：致病性的金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的血漿凝固酶，使血漿中纖維蛋白原轉變?yōu)槔w蛋白，附著(zhù)于細菌表面 ，產(chǎn)生凝固。 金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶：一種是與細胞壁結合的凝固酶，為結合凝固酶；另一種是菌細胞釋放于培養基中，為游離凝固酶。二者的抗原性不同。 血漿凝固酶試驗 挑取Baird－Parker平板或血平板上可疑菌落1個(gè)或以上，分別接種到5mL BHI和營(yíng)養瓊脂小斜面，36℃±1℃培養18 h～24 h。 取新鮮配置兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入可疑菌落的BHI培養物0.2mL～0.3mL，振蕩搖勻，置36℃±1℃溫箱或水浴箱內，每半小時(shí)觀(guān)察一次，觀(guān)察6h，如呈現凝固（即將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現凝塊）或凝固體積大于原體積的一半，判定為陽(yáng)性結果。 同時(shí)以血漿凝固酶試驗陽(yáng)性和陰性葡萄球菌菌株的肉湯培養物作為對照。 結果如可疑，挑取營(yíng)養瓊脂小斜面的菌落到5mL BHI，36℃±1℃培養18h～48h，重復實(shí)驗。 【ppt】金黃色葡萄球菌檢驗【23頁(yè)PPT課件】 結果報告 如血漿凝固酶試驗陽(yáng)性，可判定為金黃色葡萄球菌 。 報告在25g（mL）樣品中檢出或未檢出金黃色葡萄球菌。 謝謝!

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